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抗体免疫原性预测的一般步骤

Stage 1:  抗体候选序列计算机分析和去免疫原性设计
■对客户提供的抗体可变区进行分析,找到潜在的强抗原位点
■从人抗体序列库中挑选低抗原性替换序列
■可能的话再对CDR区进行1-2个点突变
■3D建模模拟序列和点突变替换
■推荐人源化/去免疫原性的重链和轻链共10条

Stage 2:  合成和表达不同组合的人源化抗体候选物和嵌合抗体 (由委托方完成)
■ 全基因合成轻重链
■ 瞬时转染和表达不同轻重链单抗组合,每个400ml
■ ELISA评价结合和特异性
■ 评价Kon/Koff 
■ 评价生物活性
■ 评价纯度和多聚体含量(Check purity and aggregates by HPLC-SEC 、SDS-PAGE、DLS)
■ 确定大约9个候选抗体

Stage 3:  抗体候选物在大鼠体内的ADA滴度评价
■ 分别在有/无T细胞激活剂的帮助下,给大鼠注射抗体候选物,每组5只大鼠,共10种抗体(含嵌合或原研抗体),共约100只大鼠。
■ ELISA方法评价给药后大鼠产生的ADA滴度
■ 推荐不超过3个人源化/去免疫原性抗体药候选物

Stage 4:  抗体候选物在猴体内的ADA滴度和药代评价
■ 用抗体药候选物和原研抗体(共4种免疫原)分别免疫食蟹猴制备猴阳性对照,每组2只食蟹猴
■ 建立抗体在猴中的ADA桥连ELISA检测方法学,每种抗体都建立,共4个
■ 建立在猴血清中抗体浓度的间接ELISA检测方法学
■ 按常规的给药方式、剂量和频率对食蟹猴给药,每组4只猴,共4个抗体;
■ 在7-10个不同的时间点收集猴血清;
■ 用建立的桥连ELISA法检测ADA滴度;
■ 用建立的间接ELISA法检测猴血清中的抗体药浓度;
■ 检测5-6种白介素浓度;
■ 推荐1个人源化/去免疫原性抗体药物

抗体-抗原结合位点X-ray共结晶分析

京天成与国内知名实验室合作,通过X-ray共结晶的方法分析抗体和抗原的结合位点,为客户进行药物研发和专利申请提供有效数据。
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● 较短的实验周期——3个月左右即可完成试验
● 我们交付的结果——抗原和抗体复合物的高分辨率三维结构以及结合位点分析等

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